通过亲和色谱纯化所有候选物,并使用前面描述的分光光度测定法确定它们对的比活性(Chart )。虽然型TKgst对没有表现出活性,但与HLHS 相比,包含LI的所有突变体都具有更高的活性,表明该突变对的C-C键切割提供了协同效应。结果(Chart )表明,用非极性残基如Gly (HLHGLI)代替His 显着提高了活性。Gly和其他两个脂肪族残基提供的疏水环境有利于稳定的非极性头部()(图)。
与HLH(G或A)L相比,这些突变体随着时间的推移(在°C下)具有更高的热稳定性。HLHSLI活性位点的分子模型表明,Ser在位的存在有利于与Asp 的相互作用,这对于稳定链A或B的Asp 和链B或A的Arg 之间的桥似乎很重要。产物的对映体过量(ee ) 表明存在一种主要的对映体,表明TKgst突变体对C有高度的立体选择性控制。
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