Dulbecco’s Modified Eagle Medium(DMEM)是目前常使用的改良式Eagle"s培养基。DMEM与MEM含有相同的营养成分,但浓度高出2~4倍。主要用于快速生长的细胞,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)两种。DMEM含更高浓度的NaHCO3,要用10%的CO?来平衡,当然也可以在较低CO?浓度下使用。DMEM-高糖(标准型)更适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的培养,也可用于杂交瘤中瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
怎么知道您的细胞正遭受支原体摧残呢,常见的检测方法几种:1.分离培养法,将疑样本接种到支原体培养基中,观察菌落生成。缺点:培养时间长,须3~5周才能判断。2.DNA荧光染色法,利用荧光染剂 (Bisbenzimide, Hoechst 33258) 检测支原体污染,但若有些细胞易有荧光背景,可能会干扰结果判读。3.PCR法,利用特异性引物,经PCR反应检测支原体DNA,灵敏且快速。BI EZ-PCR支原体检测试剂盒:采用PCR法,简化了细胞培养中支原体污染的检测过程,可检测出细胞培养实验中常见的支原体污染。
细胞生长的时候肯定是要相互联系,大部分的细胞都是要成片生长的,应该仔细观察每种细胞的状态,抱团并不一定代表不好:1,若细胞轮廓清晰,可看清楚一个个的细胞,像葡萄一样,一串串的,就是状态好的,说明细胞在分裂。2,但大部分细胞抱团不是一件好事!如果轮廓消失,出现细胞融解或细胞变灰暗、透光性变差,就是细胞死了。葡萄状和抱团,在镜下其实很容易区别。抱团死的细胞可以看到细胞碎片。
ATP发光法,ATP是细胞的能量直接来源,ATP发光法是藉由检测细胞内ATP含量来分析细胞增殖。市面上的原理是利用外源的萤火虫荧光素(Luciferin)与荧光素酶(Luciferase),以细胞内含的ATP为能量来源,发生氧化反应产生生物冷光,因此可通过监测冷光光度,来对应ATP含量并判断细胞增殖状况。EdU检测法,EdU原理跟BrdU检测法很像,并加入能与Edu反应的荧光染料,即可利用检测荧光值侦测应用于细胞增殖,或在细胞组织级别作为标记跟踪等研究,实验过程不需要经过BrdU检测法的DNA变性处理。