抑菌剂效力测定用培养基应进行培养基的适用性检查,包括成品培养基、由脱水培养基或按配制的培养基均应检查。
7.2试验所用的菌株传代次数不得超过5代(从保藏中心获得的冷冻干燥为第0代),并采用适宜的保藏技术进行保存,以保证试验菌株的生物学特性。
铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC(B)10 104〕
大肠埃希菌 (Escherichia coli) 〔CMCC(B) 44 102〕
金黄色菌 (Staphylococcus aureus)〔CMCC(B)26 003〕
白色菌 (Candida albicans) 〔CMCC(F) 98 001〕
黑曲霉 (Aspergillus niger) 〔CMCC(F)
98 003〕
抑菌效力-菌液制备
抑菌效力-菌液制备
取大肠埃希菌、金黄色putao球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液制成 适宜浓度的菌悬液。取表 2 黑曲霉的新鲜培养物加入 3~5ml 含 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80 的 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。然后,采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内,空气抑菌效力,用含 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80 的 0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的孢子悬液。
菌液制备后若在室温下放置,药品抑菌效力,应在 2 小时内使用;若保存在 2~8℃,抑菌效力,可在24 小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在 2~8℃,在验证过的贮存期内使用。
2.薄膜过滤法
除另有规定外,按计数方法适用性试验确认的方法进行供试液制备。取相当于1g、1ml或10c㎡供试品的供试液,若供试品所含的菌数较多时,人手抑菌效力,可取适宜稀释级的供试液,照方法适用性试验确认的方法加至适量稀释液中,立即过滤,冲洗,冲洗后取出滤膜,菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基上培养。
培养和计数 培养条件和计数方法同平皿法,每张滤膜上的菌落数应不超100cfu。
菌数报告规则 以相当于1g、1ml或10c㎡供试品的菌落数报告菌数;若滤膜上无菌落生长,以lt;1报告菌数(每张滤膜过滤1g、1ml或10c㎡供试品),或lt;1乘以zui低稀释倍数的值报告菌数。
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