为了保证基因芯片数据的可靠性,芯片中还需加.上多个持家基因(housekeeping genes)作为内对照。持家基因,香港表面羟基化,如呼吸作用的酶类和细胞骨架蛋白基因等,是维持细胞正常生长发育的必须基因,其表达水平在细胞内基本不变。处理数据时,材料表面羟基化,认为持家基因的反应信号在两种组织中不变,依此确定其他基因表达信号的相对值。
尽管如此,通常原位合成方法仍然比较复杂,除了在基因芯片研究方面享有盛誉的 Affymetrix 等公司使用该技术合成探针外,羟基化表面处理,其它中小型公司大多使用合成点样法。后一方法在多聚物的设计方面与前者相似,合成工作用传统的 DNA 或多肽固相合成仪以完成,只是合成后用特殊的自动化微量点样装置将其以比较高的密度涂布于纤维膜、尼龙膜或玻片上。支持物应事先进行特定处理,例如包被以带正电荷的多聚赖酸或氨基硅烷。现在已有比较成型的点样装置出售,如美国 Biodot 公司的点膜产品以及 Cartesian Technologies 公司的 PixSys NQ/PA 系列产品。前者产生的点阵密度可以达到 400/cm2 ,后者则可达到 2500/cm2 。
防脱片的成分为载玻片(盖玻片)、玻片修饰剂(黏附剂),常用的黏附剂有APES(3-Aminopropyl-Triethoxysilane 3-氨丙基-3-乙氧基)、多聚-L-赖氨酸(Poly-L-Lysine)、明胶、蛋清等。细胞学常用黏附剂为APES和多聚-L-赖氨酸 ,硅片表面羟基化,组织学常用明胶、蛋清等。
一、载玻片和盖玻片的处理
将载玻片或培养用的小盖片浸泡在清洁液中24小时,然后流水充分冲洗,再用蒸馏水冲洗3遍以上,而后置95%乙醇中12小时。取出擦干或烤干,贮放于玻片盒内备用。盖玻片很薄,以上处理程序必须缩短时间,清洁液浸泡只需2小时,流水冲洗注意勿损伤玻片。
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